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凍干熒光PCR試劑凍干方法是將熒光PCR試劑經(jīng)過預(yù)凍，在真空狀態(tài)下進(jìn)行升華，后可制備成凍干粉。凍干熒光PCR試劑時(shí)，選用的反應(yīng)管在做凍干時(shí)有許多不足之處：1.由于反應(yīng)管呈上寬下窄的錐字形，還需要借助其他工具支撐，這樣反應(yīng)管試劑與凍干機(jī)擱板的接觸面積很小，升華時(shí)傳熱會(huì)受到限制，延長(zhǎng)了預(yù)凍和升華的時(shí)間，反應(yīng)管中的凍干程序一般在24～30小時(shí)，凍干制品日產(chǎn)量很低。2.反應(yīng)管中的凍干，在加入凍干混合試劑后，需要進(jìn)行離心處理，排出氣泡，并將粘附在反應(yīng)管壁上的試劑離心下來。3.反應(yīng)管中的...
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熒光定量PCR的效率值可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線獲取。理想的反應(yīng)效率為100%。效率較高（高于110%）一般說明反應(yīng)過程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA質(zhì)量較差，模板濃度過高及含有核酸鈍化的殘余物。反應(yīng)效率較低（低于90%）的原因有試劑濃度不適（主要是引物、鎂、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重試驗(yàn)中）。造成效率低的其他因素有引物Tm之間的差異超過5℃或者是熱循環(huán)條件不適。抑制作用和較低的效率會(huì)影響分析的靈敏度，導(dǎo)致動(dòng)態(tài)范圍減小及通用性降低。怎樣解決呢？可在做凍...
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熒光PCR凍干芯片的制備方法簡(jiǎn)單快速，易于操作，縮短凍干所需時(shí)間，一般可在八小時(shí)內(nèi)完成凍干步驟。熒光PCR凍干芯片的制備方法示例,1.先要稱取制備凍干保護(hù)劑如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯處理過的水，置于容器中混合均勻，然后加熱至*溶解，在放入2～8℃冷卻。2.預(yù)混熒光定量PCR試劑如將PCR反應(yīng)緩沖液、引物、探針、dNTPs和DNA聚合酶混合均勻；將預(yù)混的熒光定量PCR試劑和凍干保護(hù)劑混合均勻（體積比為3:1），制備成凍干試劑；取5～8μL的凍干試劑點(diǎn)在微流控...
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凍干對(duì)熒光探針和熒光染料有防護(hù)作用，凍干可防止探針和染料降解，提高反應(yīng)的靈敏度和特異性。接著介紹一下熒光探針和熒光染料的特性。熒光探針是PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入熒光探針，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。熒光染料是在PCR反應(yīng)體系中，加入...
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單效外循環(huán)濃縮器對(duì)溶液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮時(shí)，在中藥提取、生物醫(yī)藥產(chǎn)品的提取過程中應(yīng)用尤其之多。單效濃縮器應(yīng)用于化工、醫(yī)藥、廢水處理行業(yè)中，批量小，品種多的真空濃縮過程中。單效外循環(huán)濃縮器原理是利用外加熱自然循環(huán)與真空負(fù)壓蒸發(fā)結(jié)合的方式，將溶液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，將溶劑和溶液進(jìn)行分離。生蒸汽進(jìn)入加熱室，將料液加熱上升，從噴管噴入蒸發(fā)室，進(jìn)行氣液分離，其料液從循環(huán)管回到加熱室下部再進(jìn)行加熱，料液受熱后又噴入蒸發(fā)室開成循環(huán)。當(dāng)進(jìn)入的料液濃縮到一定程度，自控儀表檢測(cè)反饋后，由出料口出料，蒸發(fā)室蒸...
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制品在凍干過程中的升華干燥，分為一次干燥和二次干燥。一次干燥的要點(diǎn)，當(dāng)凍干箱內(nèi)的壓力降到60Pa（根據(jù)制品特點(diǎn)而定）以下，就可以給制品加熱，為制品升華提供能量，制品升華的速度由加熱能力和冷阱的捕水能力而定。但凍干箱的壓力必須維持在允許的高壓力以下，板層的溫度在一次升華不要超過共溶點(diǎn)?？梢酝ㄟ^以下現(xiàn)象斷定一階段干燥結(jié)束：1.干燥層和凍結(jié)層的交界面到達(dá)瓶底并消失。2.產(chǎn)品溫度上升到接近板層的溫度。3.凍干箱的壓力且維持不變。上述現(xiàn)象發(fā)生后，至少再延長(zhǎng)0.5~1小時(shí)，以*除制品中的...
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制藥凍干機(jī)要具備安全性、可靠性、適用性。在選擇制藥凍干機(jī)時(shí)要滿足以下幾點(diǎn)性能要求。1.凍干機(jī)箱體內(nèi)部要采用大圓角設(shè)計(jì)，表面采用鏡面拋光，箱體底部采用傾角設(shè)計(jì)，要符合FDA及GMP要求。2.冷阱要采用外置盤管，冷阱內(nèi)要光亮*，避免二次污染及交叉污染。3.要采用立式冷阱快速的熱水浸泡除霜，縮短間歇時(shí)間。4.干燥箱與冷阱要采用分體式結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)無菌隔離。5.系統(tǒng)密封性要好，極限真空度要≤1Pa。6.系統(tǒng)要有低溫進(jìn)箱、二次回凍（反復(fù)預(yù)凍）、自動(dòng)進(jìn)氣和壓塞、低溫出箱的功能。7.要有回填控...
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原位凍干機(jī)是介于小型實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)和中試凍干機(jī)之間的一款機(jī)型。原位凍干機(jī)為立式，可原位預(yù)凍，減少凍干制品的污染，凍干速度快，捕水量大，0.2平米的原位凍干機(jī)凍干時(shí)間一般為15-18個(gè)小時(shí)。板層可獨(dú)立控溫，凍干制品的均一度較好，有全自動(dòng)程序，可設(shè)置完整的凍干曲線，通過凍干曲線可隨時(shí)查詢溫度及真空度曲線。方便工藝優(yōu)化及凍干驗(yàn)證。選擇原位凍干機(jī)比較適合預(yù)算成本相對(duì)較低且性能又要高于小型實(shí)驗(yàn)室凍干機(jī)的用戶。原位凍干機(jī)應(yīng)用于食品、生物研究、化工、制藥、醫(yī)學(xué)等行業(yè)。博醫(yī)康原位凍干機(jī)Pilo...
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